用于基因治療的臨床級逆轉錄病毒載體生產已經應用于一些病癥，這種病毒載體修飾體細胞需要具有基因穩(wěn)定性。γ逆轉錄病毒載體是首次應用于治療嚴重聯(lián)合免疫缺陷患者。
如今，基于更加復雜的慢病毒設計的其他逆轉錄病毒基因轉導載體，如人免疫缺陷病毒（HIV）-1，已經在臨床上用于治療遺傳性疾病或HIV感染。
慢病毒載體（LV）提供了許多有價值的特性，包括穩(wěn)定的將基因整合到宿主基因組中，通過VSV-G假型分型將遺傳信息轉移到分裂和非分裂細胞以及廣泛的組織趨向性能力。
目前正在臨床試驗中用于治療罕見和更頻密的遺傳和后天疾病，以及CAR-T細胞癌癥治療。慢病毒載體（LV）是基因和細胞治療應用的關鍵工具。目前如何為臨床應用提供足夠數(shù)量的載體仍是一個難題。
采用貼壁細胞大規(guī)模生產慢病毒
大多數(shù)大規(guī)模生產都是小規(guī)模生產的直接放大，即通過增加培養(yǎng)/生產單元來實現(xiàn)。生產基本上采用大量的多層培養(yǎng)系統(tǒng)（Cell Factories（CF）（CF-10））或者Cell Stacks（CS）（如圖）。
耐思10層細胞工廠（BioFactory?）
分不同蓋型
因為易于操作，10疊層裝置（CS-10）是首選，雖然原則上40疊層裝置同樣也可以用，但是因為它重量增加的原因所以需要特殊的處理系統(tǒng)。此外，每層平板的氣體交換及培養(yǎng)基層不可能一致，因此用顯微鏡控制40疊層裝置細胞的生長很困難。生產要么采用放在層流工作臺的開放模式，要么采用半封閉模式，后者對操作人員、環(huán)境及終產品的安全性更高。
收獲是通過簡單的培養(yǎng)基置換完成的，在某些情況下，通過增加收獲次數(shù)來提高最終慢病毒的質量。然而，在臨床前及臨床級大規(guī)模生產時，頻繁收獲是不現(xiàn)實的，因此在大多數(shù)時候只是收獲1-3次。
根據(jù)10疊層培養(yǎng)設備的數(shù)量及收獲次數(shù)的多少，可采用10-24個CF-10設備一次生產周期可以收獲的體積介于20-52升之間。
在貼壁培養(yǎng)系統(tǒng)中，培養(yǎng)上清可以間隔一天收獲兩次，這是一個提高成本效益的好方法。在懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)中，這種方法很難實現(xiàn)。
采用懸浮培養(yǎng)生產慢病毒
雖然轉染貼壁細胞是生產慢病毒的金標準方法，但是這個方法在擴大規(guī)模上受限。對工業(yè)化生產來說，在大的生物反應器中培養(yǎng)細胞通常是最便捷的方式。
在生物反應器中生產需要對懸浮的生產細胞擴大培養(yǎng)。多個用于生產慢病毒的細胞系(293T、293FT、293SF-3F6)被報道易于在化學成分限定的培養(yǎng)基(Freestyle 293 and F17, Invitrogen, Carlsbad, CA; HyQSFM4TransFx293, Hyclone, Logan, UT)中適應懸浮培養(yǎng)。這些細胞可以在沒有為載體的情況下迅速懸浮生長，這使得它們的培養(yǎng)和擴大比貼壁培養(yǎng)的細胞容易很多。此外，培養(yǎng)基中沒有牛血清及其他動物來源的組分是臨床生產最合適的情況，它可以降低被外源物質污染的風險。
在懸浮培養(yǎng)模式下，細胞可以通過不同的容器進行擴大：搖瓶、玻璃生物反應器、不銹鋼生物反應器、培養(yǎng)袋及一次性攪拌容器。有報道采用HEK293T細胞進行擴增、轉染、慢病毒生產可以用一次性的生物反應器實現(xiàn)50L的規(guī)模。
耐思搖瓶系列（容量：125mL、250mL、500mL、1000mL）
適用于培養(yǎng)懸浮細胞
利用懸浮細胞瞬時轉染大規(guī)模生產慢病毒是可行的，并且顯示出良好的產量。但是，在轉移到工業(yè)生產之前，該技術還需要進一步完善。優(yōu)化的主要瓶頸是轉染過程本身，它需要大量質粒DNA，從而使生產過程極其昂貴。一種工業(yè)友好、減少DNA的消耗、提高生產細胞的百分比的轉染技術是使這一過程在未來工業(yè)中有利可圖的關鍵因素。
